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酵母雙雜

 酵母雙雜交系統是將待研究的兩種蛋白質的基因分別克隆到酵母表達質粒的轉錄激活因子(GAL4)DNA結合結構域基因,構建成融合表達載體,從表達產物分析兩種蛋白質相互作用的系統。同以往研究蛋白質—蛋白質之間相互作用的實驗手段相比,雙雜交系統具有其獨特優勢。

 

技術優勢:

1. 融合體蛋白之間的相互作用是在真核酵母細胞內進行,蛋白質有可能保持天然的折疊狀態,類似其在體內生理狀態下的情況,這是其他離體生化檢驗方法所缺乏的,因此較之后者,它所證實的蛋白質間相互作用將更接近于在體的真實水平。

2. 雙雜交系統的敏感度即高,可以檢測到在蛋白質之間結合常數低至 1mmol/L 左右的微弱作用。許多微弱或短暫的蛋白質之間的相互作用可以借助報道基因表達過程中的多級放大效應反映出來;融合蛋白基因在強啟動子的作用下,處于較高的表達水平。

3. 在篩選 cDNA 文庫時,雙雜交系統能夠簡捷地得到編碼相互作用蛋白的基因序列,它只需構建質粒而不必準備抗體或純化蛋白,省略了其它體外檢測蛋白之間相互作用方法所必須的蛋白抽提、純化等繁瑣步驟。

 

酵母雙雜交系統的應用

1、高靈敏度地檢測蛋白-蛋白的交互作用;

2、尋找在蛋白-蛋白交互作用中起關鍵作用的結構域或活性位點;

3、尋找與靶蛋白相互作用的新蛋白;

4、尋找具有藥物治療作用的小分子多肽;

5、尋找調控蛋白質相互作用的化合物;

6、繪制蛋白質相互作用圖譜。

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